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          檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)了負(fù)值,怎么辦?

          共 3074字,需瀏覽 7分鐘

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          2021-07-04 22:24

          在臨床生化檢驗(yàn)工作中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)負(fù)值,不但困擾著工作人員,而且還影響醫(yī)生對(duì)疾病的診斷,因此如何處理工作中出現(xiàn)的負(fù)值非常重要。下面我們就來(lái)一起分析一下產(chǎn)生負(fù)值的原因以及如何解決。


          01

          負(fù)值產(chǎn)生的原因




          首先我們要知道生化檢驗(yàn)結(jié)果是如何得到的,以CRE為例。

          CRE在15、16點(diǎn)吸光度的均值為A1, 在33、34點(diǎn)吸光度的均值為A2,那么CRE的吸光度AX=A2-A1。



          然后將Ax代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中就可得到CRE濃度Cx。 

           計(jì)算公式為:Cx={K*(AX-B)+C1}*IFA+IFB



          STD(1):空白液 (第一標(biāo)液)

          STD(2):標(biāo)準(zhǔn)液 (第二標(biāo)液)


          K為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率;FA+IFB為儀器常數(shù);C1一般為0。因此濃度計(jì)算公式可以簡(jiǎn)化為:Cx=K*(AX-B);

          然后由公式及AX=A2-A1就可以得出負(fù)值的原因:AX-B<0或A2-A1<0。


          當(dāng)AX-B<0表示檢測(cè)項(xiàng)目的吸光度小于空白吸光度;一般為檢測(cè)系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題導(dǎo)致杯空白過(guò)高。

          當(dāng)Ax<0表示試劑原因或標(biāo)本原因,導(dǎo)致反應(yīng)向相反方向進(jìn)行。


          02

          出現(xiàn)負(fù)值怎么辦?



          經(jīng)過(guò)上面的分析我可看出,導(dǎo)致負(fù)值的原因有以下3點(diǎn):


          1、標(biāo)本原因:這種情況只導(dǎo)致某一份檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值。

          2、試劑原因:這種情況導(dǎo)致多份檢測(cè)結(jié)果中某一檢測(cè)項(xiàng)目出現(xiàn)負(fù)值

          3、檢測(cè)系統(tǒng)原因:這種情況導(dǎo)致多份檢測(cè)結(jié)果中多個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目出現(xiàn)負(fù)值


          可以按照以下步驟進(jìn)行處理:


          1、查看標(biāo)本是否脂血,如果是嚴(yán)重脂血標(biāo)本試試高速離心后再檢測(cè)或讓患者清淡飲食幾天后再抽血檢測(cè)。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)


          2、檢查試劑瓶R1/R2有沒(méi)有放反。


          3、考慮試劑R1/R2添加錯(cuò)誤,實(shí)際操作中這種情況可能性較大,可將R1/R2整瓶更換之后重新測(cè)試看看(反應(yīng)曲線會(huì)有所表現(xiàn),如果不會(huì)看的話直接換掉試試,注意是連瓶子一起換掉!)。


          4、如果是酶類項(xiàng)目或者速率法的項(xiàng)目出現(xiàn)負(fù)值或異常偏低的情況,考慮底物耗盡,可稀釋重測(cè)(反應(yīng)曲線也可以看得出來(lái))。


          5、試劑連帶瓶子一起換掉,重新定標(biāo)、做試劑空白,做質(zhì)控再測(cè)標(biāo)本一般來(lái)講,可解決相當(dāng)大的一部分結(jié)果問(wèn)題,也比較容易操作)。


          6、特別說(shuō)下總膽紅素和直接膽紅素,這兩個(gè)可能是負(fù)值出現(xiàn)頻率較高的項(xiàng)目,因?yàn)樗麄兎磻?yīng)的吸光度變化比較小,一般也就幾百的吸光度變化。


          除了要注意樣本、定標(biāo)品、質(zhì)控品的避光以及試劑空白之外,建議定標(biāo)的時(shí)候增加一個(gè)0濃度,也就是采用兩點(diǎn)定標(biāo),一般采用的是單點(diǎn)定標(biāo),默認(rèn)0濃度的時(shí)候吸光度為0通過(guò)原點(diǎn),但有時(shí)候其實(shí)不是的,對(duì)膽紅素這種反應(yīng)度比較低的項(xiàng)目還是有影響的。


          部分生化分析儀的原裝膽紅素試劑,結(jié)果應(yīng)該會(huì)比較好一些,專門(mén)設(shè)置了通道測(cè)定樣本的吸光度,反應(yīng)的吸光度會(huì)減掉樣本的吸光度再進(jìn)行計(jì)算。


          7、與儀器或試劑的廠家工程師聯(lián)系,尋求幫助。


          03

          影響生化檢驗(yàn)結(jié)果的主要因素


          1、燈泡老化或質(zhì)量問(wèn)題:

          部分生化分析儀是要求吸光度>19000或750小時(shí)需要更換。

          2、反應(yīng)杯臟或者損壞:

          部分生化分析儀是要求與1號(hào)反應(yīng)杯的吸光度差值<±800。

          3、清洗針堵塞或者漏氣:

          反應(yīng)液無(wú)法抽走或者無(wú)法添加清洗液進(jìn)行清洗;也有的可能會(huì)在測(cè)試中滴水,反應(yīng)液被稀釋,造成吸光度突然下降,可能出現(xiàn)負(fù)值。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)

          4、攪拌棒清洗不干凈:

          攪拌棒有一層特氟龍涂層,如果被刮壞,不易洗干凈,易造成交叉污染。

          5、樣品針堵塞:

          樣品沒(méi)有被加入到反應(yīng)杯,沒(méi)有發(fā)生反應(yīng),反應(yīng)曲線是一條直線,吸光度沒(méi)有變化,差值為負(fù),出現(xiàn)負(fù)值。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)

          6、試劑R1/R2添加錯(cuò)誤:

          很多實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該都是習(xí)慣于在試劑快用完了時(shí),往試劑瓶里面添加試劑的做法,部分生化分析儀加樣順序是:樣本S+試劑R1+試劑R2,因?yàn)橹饕磻?yīng)物在R2,如果放反了,樣本S和試劑R2直接就開(kāi)始反應(yīng),吸光度上升,等試劑R1加入后吸光度下降,吸光度差值為負(fù),結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值。


          7、嚴(yán)重脂血或黃疸標(biāo)本:

          加入樣品S+R1時(shí)吸光度就很高,加入R2之后反應(yīng)的吸光度可能還沒(méi)有S+R1高,吸光度差值為負(fù),結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值。


          8、長(zhǎng)時(shí)間未定標(biāo)或未做試劑空白:

          試劑使用時(shí)間太長(zhǎng)被污染或變質(zhì),試劑空白吸光度升高很多,等到你下次更換一瓶新試劑的時(shí)候,未定標(biāo)或未做試劑空白,使用的還是被污染之后的定標(biāo)和試劑空白結(jié)果,可能出現(xiàn)負(fù)值(見(jiàn)過(guò)超過(guò)一年沒(méi)有定標(biāo),沒(méi)有做試劑空白的)。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)


          9、底物耗盡:

          通俗的講就是,濃度太高,試劑里面的反應(yīng)物不夠用了,造成吸光度異常下降或上升。一般酶類項(xiàng)目會(huì)出現(xiàn)這樣的情況,可采取稀釋重做。


          04

          實(shí)戰(zhàn)案例分析


          今日審核患者結(jié)果時(shí)發(fā)現(xiàn),LP(a)結(jié)果出現(xiàn)較多負(fù)值,依據(jù)過(guò)往經(jīng)驗(yàn),首先排除標(biāo)本因素,如標(biāo)本量過(guò)少,血清中有氣泡或纖維蛋白原,標(biāo)本嚴(yán)重脂血等,然而發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)本沒(méi)有這些問(wèn)題。


          進(jìn)一步分析,查看AU5831檢測(cè)結(jié)果為負(fù)值的標(biāo)本,調(diào)取反應(yīng)曲線,如圖1,圖2,正常反應(yīng)曲線如圖3。



          LP(a)檢測(cè)方法為兩點(diǎn)終點(diǎn)法,反應(yīng)監(jiān)測(cè)12,27兩點(diǎn)吸光度,與正常反應(yīng)曲線對(duì)照,可見(jiàn)結(jié)果異常的曲線中,加入試劑2(R2)后吸光度出現(xiàn)不穩(wěn)定的變化,可出現(xiàn)1-2個(gè)小峰,當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡,27點(diǎn)的吸光度值若小于12點(diǎn)吸光度值,則檢測(cè)結(jié)果可出現(xiàn)負(fù)值,由此考慮反應(yīng)體系中是否存在干擾因素。


          如我們此前案例報(bào)道的,因日常工作中常需檢測(cè)腎內(nèi)血透患者標(biāo)本,此類血液標(biāo)本離體后的凝集過(guò)程較緩慢,需幾十分鐘甚至更長(zhǎng)的時(shí)間,常表現(xiàn)為反復(fù)離心反復(fù)血清凝集的現(xiàn)象,故檢測(cè)過(guò)程中較易產(chǎn)生凝塊,長(zhǎng)期積累有時(shí)可粘附杯壁,較難清洗,且易堵塞清洗比色系統(tǒng)的抽取廢液的探針或管路。另一方面,生化管中存在分離膠,離心不當(dāng)有時(shí)可造成溶膠,凝膠亦可粘附杯壁及造成抽取廢液的探針或管路堵塞。遂首先觀察比色杯是否異常,查看檢測(cè)結(jié)果為負(fù)值的LP(a)所使用的比色杯,比較同一比色杯檢測(cè)的不同項(xiàng)目是否出現(xiàn)相同的曲線異常,如圖4,圖5,圖6。



          如上圖,通過(guò)比較可見(jiàn),同樣使用201號(hào)比色杯,LP(a)曲線異常,而ALP和CHO曲線正常,其他比色杯亦只有LP(a)檢測(cè)異常,由此可排除比色杯因素造成檢測(cè)結(jié)果為負(fù)值。


          既然不是比色杯異常影響比色,則進(jìn)一步分析考慮是否為光源不穩(wěn)定產(chǎn)生干擾。LP(a)檢測(cè)為單波長(zhǎng),所用波長(zhǎng)為600nm,故重點(diǎn)觀察600nm附近檢測(cè)波長(zhǎng)的項(xiàng)目,通過(guò)比較可知,TG(如圖5),主波長(zhǎng)為660nm,CHO(如圖6),主波長(zhǎng)為540nm,兩者反應(yīng)曲線平滑,且其他波長(zhǎng)(如340nm等)處的檢測(cè)項(xiàng)目均未見(jiàn)異常,由此排除光源不穩(wěn)定造成的檢測(cè)結(jié)果為負(fù)值。


          排除以上標(biāo)本及儀器因素的干擾,明確僅有LP(a)一個(gè)項(xiàng)目結(jié)果異常后,接下來(lái)則考慮試劑因素。從異常的反應(yīng)曲線可見(jiàn),試劑1加入后曲線無(wú)異常,而加入R2后,吸光度出現(xiàn)不穩(wěn)定變化,故推測(cè)干擾來(lái)自R2試劑,疑R2試劑被污染,于是將R2試劑全部更換,隨后進(jìn)行校準(zhǔn),質(zhì)控,室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控,反應(yīng)曲線如圖7。



          更換試劑后,將檢測(cè)結(jié)果異常的標(biāo)本重新檢測(cè),反應(yīng)曲線恢復(fù)正常,結(jié)果為正值。


          生化檢驗(yàn)中項(xiàng)目的檢測(cè)干擾因素眾多,當(dāng)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)異常時(shí),如何對(duì)問(wèn)題進(jìn)行分析處理是每個(gè)生化檢驗(yàn)人員應(yīng)具備的能力。反應(yīng)曲線作為生化反應(yīng)過(guò)程的直觀反映,當(dāng)遇到問(wèn)題時(shí),我們可以通過(guò)分析曲線,查找檢測(cè)過(guò)程中誤差、失控產(chǎn)生的原因,從而有針對(duì)性地找到解決問(wèn)題的方法,使儀器盡快恢復(fù)正常工作。


          資料來(lái)源:基層檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)、妙畢生化、檢驗(yàn)視界網(wǎng)、臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)

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